Yleinen

Alkionsiirto Maresissa

Alkionsiirto Maresissa

Alkionsiirto on avustetun lisääntymisen tekniikka, jolla alkio siirretään luovuttavan tamman kohdasta vastaanottavaan tampaan, joka kuljettaa raskauden määräajassa, kohtuun. Alkio otetaan talteen luovuttaja-tammasta yleensä kohdun huuhtelua (pesua) käyttäen noin 6 - 8 päivää ovulaation jälkeen. Alkio asetetaan sitten synkronoidun vastaanottaja-taman kohtuun.

Edut

  • Arvokas tamma voi tuottaa useamman kuin yhden varsan vuodessa.
  • Tammat voivat kilpailla tuottaen varsia.
  • Nuoret, geneettisesti arvokkaat tammat voivat aloittaa varsien tuottamisen ennen fyysisen kypsyyden saavuttamista tai harjoittelun aikana.
  • Ikääntyneet tammat, jotka eivät kykene kantamaan varsaan kohdun biopsiaan perustuvan patologian vuoksi, voivat edelleen tuottaa varsoja.
  • Fyysisesti vammaiset tammat, jotka estävät raskauden tai varsat, kuten vatsalihasten repeytyminen tai vanhojen lantion murtumien, voivat silti tuottaa jälkeläisiä.

    Haitat

  • Menettely on kallis.
  • Jotkut rodunyhdistykset panevat täytäntöön rajoituksia tai kieltoja.
  • Alkioiden siirtäminen tammoissa vaatii erityiskoulutusta, ja siksi kaikki hevoseläimet tai ammattilaiset eivät ole valmiita tarjoamaan tätä palvelua

    Tämän menettelyn onnistuminen riippuu kyvystä hallita jotain seuraavista tekijöistä:

  • Luovuttaja-taman luontainen hedelmällisyys, jota ei voida hallita. Lisäksi monissa tapauksissa hedelmällisyys on syy siihen, miksi joistakin tammoista tulee alkionsiirtoehdokkaita.
  • Vastaanottavien tammien luontainen hedelmällisyys. Nämä tammat tulisi valita nuoren iän ja normaalin lisääntymiskyvyn perusteella.
  • Jalostustoiminnan hallinnan tai ajoituksen tulisi olla sopivia alkionsiirtoa suoritettaessa.
  • Alkion palauttamis- ja siirtotekniikka. Eläinlääkärin kokemuksella on tärkeä rooli toimenpiteen onnistumisessa.
  • Luovuttajan ja vastaanottajan synkronointiaste. Luovuttaja- ja vastaanottaja-tammat synkronoidaan hormonien käytön kanssa; tiukka synkronointi on tärkeää varmistaa, että alkio siirretään sopivaan kohtuympäristöön.

    Laitteet alkionsiirtoon

    Alkionsiirto-ohjelman käynnistäminen edellyttää erikoistuneen laboratorion perustamista. Alkionsiirtolaitteita on kaupallisesti saatavana useimmista hevoseläinten jalostustarvikkeita myyvistä yrityksistä. Tavanomaisessa rutiininomaisessa avustetussa jalostuksessa käytettävien laitteiden, kuten ultraäänilaitteen, lisäksi vaaditaan seuraavat:

  • Foley-katetrit huuhtelevat luovuttajan kohtu. Tämä on erityinen katetri, jota käytetään luovuttavan tamman kohtuun huuhtelemiseen alkion palautumista varten. Pallo sen päässä mahdollistaa katetrin asettamisen tamman kohdunkaulaan, estäen nestehukkaa huuhteluvaiheen aikana.
  • Ylimääräiset letkut ja liittimet, jotka on kiinnitetty Foley-katetrin päähän nesteen johtamiseksi ja huuhtelemiseksi tamman kohtuun.
  • Erityiset suodattimet alkion talteenottamiseksi huuhtelunesteestä.
  • Leikkausmikroskooppi alkion etsimiseksi.
  • Steriilit viljelyastiat, kapillaarilasipipetit ja muut laboratoriovälineet.

    Alkionsiirtoon yleisimmin käytetty huuhteluväliaine on Dulbeccon fosfaattipuskuroitu suolaliuos (DPBS), jota on täydennetty 10 prosentilla vasikan sikiön seerumia ja antibiootteja. Tätä väliainetta käytetään myös alkion pesemiseen ja siirtämiseen vastaanottajan kohtuun. Elatusaine voidaan ostaa nestemäisessä tai jauhemaisessa muodossa ja rekonstituoida laboratoriossa. Jotkut lääkärit käyttävät vaihtoehtona DPBS: lle, joka on kallista, laktoitujen Ringers-ratkaisujen sijaan.

    Ennen alkion palauttamisyritystä kaikki astiat ja väliaineet tulee lämmittää ruumiinlämpöiseksi inkubaattorissa alkion kylmäiskun välttämiseksi. Kaikkien laitteiden tulee olla joko kertakäyttöisiä tai pestä kunnolla ja steriloida ennen käyttöä. Alkionsiirtolaitteiden pesussa ei saa käyttää pesuaineita tai desinfiointiaineita, koska ne voivat jättää jäämiä, jotka voivat vaarantaa alkion elinkelpoisuuden. Laitteet pestään vain lämpimällä vesijohtovedellä ja huuhdellaan sitten huolellisesti tislatulla vedellä. Uudelleen käytettävät katetrit, letkut ja suodattimet on steriloitava kaasusteriloinnilla ennen käyttöä.

    Erilliset Foley-katetrit tulisi varata alkion palauttamismenettelyihin, eikä niitä saa sekoittaa niihin, joita käytetään infektoituneiden tammojen kohtuun pesemiseen.

    Vastaanottajien valitseminen alkionsiirtoa varten

    Kannattaa sijoittaa aikaa ja rahaa optimaalisten vastaanottajien valintaan, koska olisi hukkaa sijoittaa resursseja ja asiantuntemusta luovuttavan tamman kasvattamiseen ja alkion palauttamiseen ja sen jälkeen sen tammen kohtuun, joka ei voinut varsaa kantaa. termi. Tämän vuoksi kaikille tammoille, jotka on ostettu alkionsiirto-ohjelman vastaanottajaksi, olisi tehtävä täydellinen jalostustehokkuuden koe. Kaikkien tammojen, jotka tekevät sen vastaanottajaohjelmaan, tulee läpäistä kaikki BSE: n näkökohdat ja niiden endometriumin (kohdun limakalvo) on oltava terveitä arvioitaessa biopsianäytteestä.

    Vastaanottajien ikä on myös tärkeä. On todennäköisempää, että kypsä, mutta suhteellisen nuori tamma (5 - 8 vuotta vanha) kykenee kantamaan varsan teräkseen. Usein vastaanottajana ostetut tammat hankitaan julkisten huutokauppojen kautta ja ikä ei ole tiedossa. Iän arvioinnissa hammasarvioinnin avulla pitäisi olla varma.

    Ihannetapauksessa tammat vastaanottajaohjelmassa olisi valittava ruumiin koon mukaan, joka on samanlainen tai hiukan suurempi kuin luovuttavan tamman rodun koko. On tunnettua, että tamman koko vaikuttaa varsan kokoon riippumatta luovuttajan geneettisestä syötöstä.

    Viimeinkin kannattaa valita tammat, joilla on hyvä taipumus, ei vain siksi, että niitä on paljon helpompi käsitellä koko prosessin ajan, vaan myös siitä syystä, että ne saattavat tehdä parempia äitejä. Tässä suhteessa taman taustan tuntemisen ja aiemmin epätapahtumasti lentäneen tamman valitsemisen tulisi olla ihanteellinen. Paitsi että tiedät varmasti, että tamma kykenee kantamaan varsan, mutta myös tamman äitiys. Valitettavasti vastaanottaja-tammien menneisyys on usein tuntematon, ellei asiakas anna sitä.

    Luovuttajien ja vastaanottajien synkronointiprotokolla

    Luovuttajien ja vastaanottajien tahdissa käytetään monia synkronointiprotokollia henkilökohtaisista mieltymyksistä ja kokemuksesta riippuen. Luovuttajalle ja vastaanottajalle annetaan hormonit manipuloida estrus-sykliään tavoitteena, että ne kaikki lämmittävät samanaikaisesti. Nämä hoidot voivat vaihdella siitä, että tammoille annetaan yksi laukaus prostaglandiinia, tammojen sijoittamiseen progesteronin ja estrogeenikuvien täydelliseen hoitosuunnitelmaan.

    Vaikka työläs, sarja progesteroni / estrogeenikuvia tarjoaa parhaan tahdistuksen luovuttajan ja vastaanottajan välillä. Lyhyesti sanottuna, protokolla koostuu päivittäisestä injektiosta progesteronin ja estrogeenin yhdistelmästä 8-10 päivän ajan (150 mg progesteronia plus 10 mg estradiolia-17b per laukaus). Tämä tukahduttaa tamman omat hormonit, ja kun hoito lopetetaan, useimpien tammojen tulee kuumentua 3 - 5 päivässä. Koska jotkut tammat saattavat ovlatoitua hoidon aikana, prostaglandiinikuvaus annetaan yleensä progesteroni-estrogeenisarjan lopussa paremman synkronian saavuttamiseksi.

    Oraaliset progestageenit, joita markkinoidaan tammojen lämmön pitämiseksi lämmössä, eivät toimi yhtä hyvin synkronointiprotokollien kanssa.

    Kun luovuttaja ja vastaanottajat ovat kuumuudessa ja luovuttaja tamma on kasvatettu sopivaan oriin, ovulaatio voidaan indusoida kaikille tammoille antamalla heille laukaus ihmisen kooriongonadotropiinista. Tämä varmistaa tiukemman ovulaatiosynkronian luovuttajan ja vastaanottajan välillä. Vastaanottaja on ihanteellinen, jos hän ovulaation tapahtui samana päivänä tai yhden päivän luovuttajan jälkeen. Vähemmän ihanteellisia vastaanottajia ovat ne, jotka ovulatoivat päivää ennen luovuttajan ovulaatiopäivää tai kauempana siitä.

    Valitettavasti jopa parhaat synkronointiprotokollat ​​voivat epäonnistua ja luovuttajat ja vastaanottajat eivät aina pääse synkronoituun kuumuuteen ja ovulaatioon odotetusti. Tämä on hyvä syy, että jokaisella luovuttaja-tammalla on aina oltava useampi kuin yksi vastaanottaja. Suositellaan vähintään kahta vastaanottajaa per luovuttaja, kolme olisi ihanteellinen.

    Luovuttajamaren jalostustoiminta

    Ensimmäinen alkionsiirto-ohjelman onnistumista rajoittava tekijä on, että luovuttaja-taman tulee tulla raskaaksi. Siksi on ehdottomasti käytävä hyvä luovuttaja-tamman jalostusjohtaminen.

    Luovuttava tamma voidaan kasvattaa tuoreella tai kuljetetulla jäähdytetyllä siemennesteellä. On tärkeää, että siemenneste on hyvälaatuista ja orilla on vakiintuneet raskausasteet. On selvää, että tamman ihanteellinen ori ei ole aina valittu hedelmällisyyspotentiaalin suhteen. Vanhoja ja hedelmättömiä orjia tulisi kuitenkin välttää, jotta estetään toisen tekijän esiintyminen, joka voi estää alkionsiirto-ohjelman onnistumisen. Samasta syystä pakastetun sulatetun siemennesteen käyttöä tulisi välttää.

    Optimaalinen jalostusjohtaminen koostuu tamman jalostamisesta esiintymisen aikana mahdollisimman lähellä ovulaatiota. Ihannetapauksessa luovuttajan ja vastaanottajien lisääntymiskanavat tulisi tutkia päivittäin palpaation ja ultraäänitutkimuksen avulla peräsuolen kohdalla, jotta voidaan varmistaa optimaalinen aika luovuttajan lisäämiselle ja arvioida synkroniaa vastaanottajan kanssa.

    Kasvatusvaiheessa luovuttajalle on annettava injektio ihmisen kooriongonadotropiinista ovulaation indusoimiseksi, ja vastaanottajia hoidetaan samalla tavalla (mutta ei kasvatettu) tiukempaan ovulaation synkroniaan.

    Ovulaatio tulee aina vahvistaa ultraäänitutkimuksella. Ovulaatiopäivää pidetään ”päivänä 0” ja luovuttavan tamman kohtu huuhdellaan yleensä päivänä 7 ovulaation jälkeen.

    Alkionkeruumenettely

    Alkion toipuminen luovuttaja-tammasta suoritetaan yleensä päivänä 7 posttovulaation. Ensin tamma tarkistetaan palpaation ja ultraäänitutkimuksen avulla peräsuolessa kohdun sävyn ja ulkonäön selvittämiseksi. Raskaana olevalla tammalla on todennäköisesti erittäin äänisen, homogeeninen kohtu, suljettu kohdunkaula ja kohdussa ei ole nestettä, kuten ultraääni näyttää. Tällä hetkellä alkio on liian pieni, jotta sitä voidaan nähdä ultraäänellä.

    Tamma valmistetaan alkion palautumiseksi puhdistamalla perineaalialue (vulva, peräaukko ja pakarat) povidonijodilla (Betadine) kolme kertaa ja huuhtelemalla huolellisesti vedellä jokaisen hankauksen jälkeen. Runsaan huuhtelun jälkeen alue kuivataan puhtailla paperipyyhkeillä.

    Alkionsiirron palautuksen suorittavan henkilön on käytettävä puhdasta palpausholkkia ja steriilejä käsineitä, ja voiteluun on käytettävä steriiliä, vesipohjaista hyytelöä. Yksi käsi viedään tamman emättimeen Foleyn katetrin kuljettamiseksi kohdunkaulan läpi ja kohdun vartaloon. Sitten katetrin pallo täytetään ilmalla, käyttämällä pientä ruiskua, ja asetetaan siten turvallisesti kohdunkaulaan, jotta nestettä ei menetetä kohtuun huuhtelun aikana.

    Alkionkeräystoimenpiteiden suorittamiseen kuluu ainakin kaksi ihmistä, joista toinen pitää katetria taman traktissa, ja avustaja, joka auttaa nesteen asettamisessa ja palautumisessa. Yksi litra nestettä johdetaan tamman kohtuun painovoiman avulla, sitten otetaan talteen suureen lasisylinteriin tai johdetaan suoraan suodattimen läpi alkion sieppaamiseksi. Tämä toistetaan kolme kertaa.

    Jotakin nestettä tulisi pitää talteenottosuodattimessa alkion kuivumisen välttämiseksi. Kun talteenotto on valmis, suodattimessa oleva neste dekantoidaan Petri-maljaan. Alkio etsitään suurennuksella leikkausmikroskoopilla.

    Alkionsiirtomenettely

    Jos elpyminen tapahtuu 7. päivänä postovulaation jälkeisenä päivänä, alkion tulisi olla blastokystivaiheessa ja sen tulisi olla helppo visualisoida leikkausmikroskoopilla kokeneen käyttäjän toimesta.

    Löytymisen jälkeen alkio pestään steriilissä DPBS: ssä 10-prosenttisella vasikan sikiön seerumilla. Alkioita voidaan käsitellä 0,25 ml: n ranskalaisilla siemennesteen pakastussanoilla tai lasipipetteillä, jotka on kytketty kumipulloon tai pieneen tuberkuliiniruiskuun.

    Alkio siirretään tavallisesti transcervikaalisesti eli tamman kohdunkaulan läpi ikään kuin suorittaisi keinosiemennystä. Tähän tarkoitukseen:

  • Valittu vastaanottaja valmistautuu siirtämiseen käärimällä ja sitomalla hännänsä. Hänen kohtu on tarkistettava sävyn ja nesteen varalta. Alkiota ei tule koskaan siirtää tampaan, jonka kohtu on nestettä.
  • Sitten vastaanottavan tamman perineaalialue puhdistetaan perusteellisesti, kuten luovuttajalle selitetään.
  • Alkio voidaan ladata keinosiemennyspipettiin, joka on kytketty 5 ml: n Air-Tite-ruiskuun. Noin 1 ml ilmaa ladataan ensin ruiskuun, sitten pipettiin ladataan kolme pientä väliainitaskua, jotka on erotettu toisistaan ​​ilmataskuilla siten, että nestetasku keskellä sisältää alkion.
  • Siirtotoimenpiteen suorittavan henkilön on käytettävä steriiliä kirurgisia käsineitä puhtaan olkapään pituisen muoviholkin päällä. Pipetti työnnetään emättimeen ja viedään varovasti kohdunkaulan läpi. Kun se on edennyt kohdun runkoon, ruiskun mäntä työnnetään eteenpäin ja alkio injektoidaan kohtuun.
  • Vastaanottava tamma tulee tarkistaa raskauden suhteen noin 7 päivää siirron jälkeen.

    Toinen mahdollisuus on suorittaa kirurginen alkionsiirto. Tämä tehdään, kun sedatoitunut vastaanottaja on seisomassa asennossa kyljen viillon kautta, joka mahdollistaa kohdun torven ulkonäön. Alkioiden siirrossa kirurgisesti ei ole selvää etua, ja toimenpide on traumaattisempi vastaanottaja-tammalle.

    Joissakin tapauksissa alkionsiirtoa suorittavat omistajat tai lääkärit päättävät olla alkioiden vastaanottajia tietylle luovuttaja-tamalle. Tämä välttää vaivaa vastaanottajien ostosta, tarkistamisesta ja ylläpidosta, samoin kuin synkronointiin liittyvistä kustannuksista ja työstä. Tällöin talteen otettu alkio voidaan lähettää lähetyskeskukseen, jossa on lukuisia vastaanottajia, jotka ovat käytettävissä siirtämiseen milloin tahansa. Tämän vaihtoehdon haitoina ovat alkion lähettämiseen liittyvät riskit ja myös se, että raskauden määrä voi vähentyä hieman, kun alkioita ei siirretä heti keräyksen jälkeen.

    Lähetystä varten alkiot pakataan steriiliin injektiopulloon, joka sisältää kaupallisen väliaineen, Hams F-10, joka puskuroidaan diffundoimalla se sekoituksella, joka sisältää 90 prosenttia typpeä, 5 prosenttia happea ja 5 prosenttia hiilidioksidia. Valmistettu väliaine voidaan tilata siirtokeskuksesta juuri ennen alkion palautustoimenpiteiden suorittamista. Tätä väliainetta on myös täydennetty vasikan sikiön seerumilla ja antibiooteilla.

    Kerättyään ja pestyään alkio asetetaan 3 ml: n steriiliin muovipulloon, joka sisältää tasapainotetun lämpimän väliaineen, ja tämä asetetaan sitten varotoimenpiteenä 50 ml: n väliainetta sisältävään sentrifugiputkeen.

    50 ml: n putki pakataan Equitaineriin jäähdytettyä kuljetusta varten.

    Pakatut alkiot tulee toimittaa lentoyhtiöllä tai yön yli kuriiripalvelulla ja siirtää heti, kun ne ovat saapuneet siirtokeskukseen, optimaalisesti ennen 24 tuntia palautumisen jälkeen.